磷酸化修饰是细胞中常见的蛋白质修饰方式,在细胞信号调控、调节减数分裂停滞或恢复、染色体分离以及纺锤体正确组装中起关键作用。为了研究热激诱导家蚕非减数分裂孤雌生殖发生相关的磷酸化修饰情况,利用i TRAQ定量磷酸化蛋白质组学技术分析了家蚕孤雌生殖系无9和其两性生殖亲本丰一热激诱导前后磷酸化蛋白水平变化,以1.5倍差异(P<0.05)为筛选条件,孤雌生殖系无9热激诱导前后共有828个差异磷酸化肽段,两性生殖系丰一热激诱导前后共有526个差异磷酸化肽段。差异磷酸化蛋白GO富集分析显示,在孤雌生殖系中富集程度最高的生物学过程为翻译和细胞氧化还原平衡,两性生殖系中为细胞内核与胞质间转运和区域化。KEGG通路富集分析显示核糖体、背腹轴建立、RNA转运、卵母细胞减数分裂和类固醇的生物合成在两个品系中均为富集程度最高的通路。进一步分析卵母细胞减数分裂通路,在孤雌生殖系和两性生殖系中各鉴定到10个磷酸化差异蛋白,其中5个为相同蛋白,但在两个品系间修饰位点不同,另5个蛋白包括有丝分裂检查点蛋白MAD1,周期蛋白依赖性蛋白激酶cdc2和钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶只在孤雌生殖系中存在磷酸化修饰差异,这些差异可能在减数分裂向孤雌生殖转变中起关键调控作用。对差异磷酸化位点进行了Motif分析和调控网络构建。此外,使用平行反应监测验证了50个蛋白的74条磷酸化肽段,证实了i TRAQ磷酸化蛋白组数据的准确性。上述研究结果为深入研究热激诱导家蚕非减数分裂孤雌生殖发生的分子调控机制提供依据。