家蚕微孢子虫转录因子Ste12调控孢子成熟的机制研究
Ste12是真菌独特的转录因子,能调控细胞周期、菌丝生长、发育和毒力等。家蚕微孢子虫作为养蚕业重要的防控病原,弄清其发育成熟机制至关重要。研究发现,家蚕微孢子虫在宿主中会经历裂殖增殖期和孢子形成期两个发育成熟阶段,究竟受哪些因素调控,目前尚不清楚。通过同源序列比对获得家蚕微孢子虫Ste12蛋白(NbSte12),发现NbSte12的N端具有STE保守结构域、C端具有转录激活活性,在Nomema bombycis感染宿主细胞的48 h和96 h高转录,并表达定位于未成熟孢子的细胞核中。利用DAP-seq测序技术分析获得大量受NbSte12调控的潜在靶基因,其中包括极管蛋白1、极管蛋白2、几丁质合成酶、孢壁蛋白26、孢壁蛋白30等N. bombycis发育成熟相关编码基因。利用RNAi和EMSA方法分析发现,NbSte12能调控这些孢子成熟相关基因的表达。干涉NbSte12会导致孢壁几丁质层厚度明显变薄,表明NbSte12影响N. bombycis孢壁几丁质层的形成。与此同时,NbSte12下调后孢子发芽率和增殖率显著降低,推测其也会影响N. bombycis极管的形成与功能。本研究为阐明N. bombycis发育成熟的调控机制奠定基础。